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ELISA试剂盒的温育方法讲解

2018-10-09

ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例,参加板孔中的标本,其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的机会,只有zui靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。这是一个逐渐平衡的进程,因而需经分散才能到达反响的结尾。在其后参加的酶符号抗体与固相抗原的结合也相同如此。这就是为什么ELISA反响总是需求必定时刻的温育。在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反响,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完结需求有必定的温度和时刻,这一保温进程称为温育,有人称之为孵育,在ELISA试剂盒中似不恰当。

温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在树立ELISA方法作反响动力学研讨时,实验表明,两次抗原抗体反响一般在37℃经1~2小时,产物的生成可达高峰。为加快反响,可进步反响的温度,有些实验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为完全,在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜,以构成zui多的沉积。但因所需时刻太长,在ELISA试剂盒中一般不予选用。

保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外,一般均选用水浴,可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度敏捷平衡。为防止蒸腾,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA试剂盒应放在湿盒内,湿盒要选用传热性杰出的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,zui后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育,反响板均不宜叠放,以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响,操作时的室温应严厉约束在规则的范围内,规范室温温度是指20~25℃,但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时,ELISA试剂盒只要平置于操作台上即可。应留意温育的温度和时刻应按规则力求。为确保这一点,一个人操作时,一次不宜多于两块板同时测定。

 

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