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2019-02-20

今天我公司技能专员特意为大家准备十几条ELISA操作的要点细节,阅览之后能够总结一下您在实验中有哪些要点被忽略掉了。酷爱ELISA实验的新手们需留意这些细节:
1.不管是试剂盒,还是其它产品,在运用之前咱们都要仔细阅览说明书。
2.相同的,一定要确定试剂盒是不是在有效期内。
3.按说明书确定一切试剂齐全(数量、体积)。
4.标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,留意低温保存。
5.ELISA实验中为了确定*佳信号和背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在恰当规模内的规范品的系列稀释。按试剂说明书常规供给的规模进行操作。
6.规范品的制造:关于每种细胞因子应仔细阅览说明书,留意每批的细节。在运用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其间的细胞因子。依据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
7.一般待测抗原规范曲线的线性规模的可通过将规范品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用规范的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改动酶底物体系可在一定规模内提高灵敏度。
8.依据检测标本数量确定所需试剂的量。
9.按说明书将所用试剂平衡至室温,制造所需试剂,DIY夹心法ELISA常见技能攻略。
10.挑选抗体时挑选一个单抗和一个多抗进行配对;若挑选两个单抗,有必要识别不同表位的抗体;从同一家公司挑选抗体对。
11.为了优化灵敏度,主张过夜孵育规范品和标本。
12.若运用过氧化物酶作为显色体系,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
13.当测定混合液体中的抗原时,如血清,主张在标本稀释液中加不相干的Ig。
14.准备好一切实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。

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